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ICR 8000离子通道阅读器
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利用原子吸收光谱仪和通量分析的离子通道技术,在离子通道筛选中起到十分重要的作用。相较于其他方法,我们能更快、更准确、更精确地评估hERG钾元素通 道。hERG通道与心脏QT间期延长综合征相关。因此,对离子通道具有调节作用的化合物需要进行QT依赖性评估。
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  • 品牌名称:加拿大Aurora
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ICR8000 利用原子吸收光谱和通量分析的离子通道技术,在离子通道筛选中起到十分重要的作用。相较于其他方法,我们能更快、更准确、更精确地评估hERG钾元素通 道。hERG通道与心脏QT间期延长综合征相关。因此,对离子通道具有调节作用的化合物需要进行QT依赖性评估。

ICR 8000有广泛的运用。例如,评定电压门控离子通道(hERG, BK/SK, Kv1.1, 1.4, 1.5, KCNQ, 2P等)和配体门控离子通道((KATP, nAChR等),帮助研究人员加快药物(治疗和预防离子通道相关疾病)的开发的工作

优势

  • 实验程序可编写及自动化
  • 自动稀释,自动建立标准曲线,自动清洗
  • 可与现有的自动化设配配套使用
  • 实验人员不需要配置稀释样品
  • 灵敏度高
  • 在线稀释

特征

  • 中等通量:高达每日5000份样品
  • 单通道:一次测量一个样品
  • 最低样品体积: 50 µl
  • 样品容器:96或384微孔盘
  • 尺寸: H.67 cm X W.55 cm X D.37 cm
  • 燃气:空气/乙炔
  • 可选配件:叠盘器,读码机
  • 灵敏度:检出限0.05ppm
  • 精确度:< 5% CV

杜绝

  • 荧光产生的冷激效应
  • 放射性同位素对健康的危害
  • 放射性同位素的废弃处置
  • 铷元素短暂半衰期给工作带来的限制
  • hERG离子通道分析理想选择

离子通道筛选服务

欧罗拉提供多种离子通道分析筛选服务,满足药物研发过程中对快速准确结果的需求。我们拥有一套方便整合的订购系统,帮助快速评估及进行国际标准化测 试。分析测试可以选择手动膜片钳或者全自动膜片钳进行。非放射性离子流析出分析(Cold Flux)适用于部分不能通过手动膜片钳筛选的化合物或药物候选分子,结果显示良好的线性相关(R=0.88),与膜片钳技术结果一致。这一方法依赖于欧 罗拉本身专利的高通量原子吸收技术检测非放射性示踪离子的技术而研发的离子通道阅读器系列:ICR 8000 和 ICR 12000

FDA规定的体外和体内的电生理研究可在以下表达体系进行:稳定的细胞株,瞬时表达所需研究离子通道的细胞,转基因爪蟾卵母细胞(2个电极电压钳),心肌细胞(从老鼠或豚鼠中新鲜分离获得),以及由人类iPS中分化得到的神经元细胞

以下是欧罗拉可提供的离子通道筛选分析服务:

应用领域

离子通道

离子流

手动膜片钳

全自动膜片钳

心脏

hERG/Kv11.1

IKr

Nav1.5

Peak, late INa

Kv1.5

IKur, Isus

Kv4.3/KChIP

Ito

KCNQ1 (Kv7.1)/KCNE1

IKs

 

HCN2

If

HCN4

If

 

Kir2.1

IK1

 

Kir3.1/Kir3/4

IKACh

 

Kv1.4

IIto

 

Endogenous Cl-

 

 

 

中枢神经系统

TRPV1

TRPV1

 

Nav1.2

INa

 

Nav1.6

INa

 

Nav1.7

INa

 

Kv1.2

Delayed rectifier

 

Kv2.1

Delayed rectifier

 

Kv3.1

Delayed rectifier

 

Kv3.2

Delayed rectifier

 

Kv4.2

IA

 

Stretch-activated K

Delayed rectifier

 

 

HCN2

hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated ion channel

   

Cav1.3

L type Ca channel

 

 

Cav1.4

L type Ca channel

 

 

Cav2.1

P/Q-type Ca channel

 

 

Cav2.2

N-type Ca channel

 

 

Cav2.3

R-type Ca channel

 

 

Cav3.1

T-type Ca channel

 

 

Cav3.3

T-type Ca channel

 

 

共转运载体

Na/K-ATPase

antiporter enzyme / cotransporter

 

 

Na, K, Cl co-transporters

cotransporter

 

 

骨骼肌

Nav1.4

INa

 

免疫系统

Kv1.3

Delayed rectifier

 

以上离子通道均可应用非放射性离子析出分析技术(Cold Flux)。部分也适用手动膜片钳或者全自动膜片钳(如标示)

 

 

心肌细胞分析

从老鼠或豚鼠中新鲜分离获得的心肌细胞。测试参数:

  • 从不同频率的剂量反应曲线中获得的IC50
  • 使用依赖性、电压依赖性阻断剂
  • 依据客户具体需要制定的实验方案

可靠、重现性好的结果

以下是部分取自于欧罗拉的离子通道筛选服务结果的实验报告图,显示了可靠以及重现性良好的结果。不管是处于药物研发的哪一阶段,获取快速准确的结果对于任何研究分析都至关重要。

IC50-of-flecainide

图1:通过测定CHO-hERG(全自动膜片钳)和HEK-hERG(手动膜片钳)中IC50,测定氟卡尼对于IhERG的影响。

IC50-of-fecainide-HEK-Kv4-2

图2:通过HEK- Kv4.2(手动膜片钳)测定氟卡尼对于IKv4.2的阻断效应

Mexiletene-and-late-inav1-5

Mexiletene-and-peak-late-inav1-5

图3:全自动膜片钳测定美西律对于峰值以及延迟INav1.5的影响(在海葵毒素ATXII存在情况下)

筛选服务范围

根据研究需求,可以完成以下一般测试化合物筛选服务。原始数据(未经分析统计)可以根据需求发送给客户。

完整测试

1

a. 完整的DR曲线(5-7个数据点),每个数据点取至少3次独立测试所得平均值;或者b. 结果通过希尔方程评测得到准确地IC50。若IC50中数据的变异系数(SD/平均值)超出25%,将以同等价钱提供最多6次独立测试数据。

2

化合物对于I-V以及G-V曲线中IC50的影响,包括适合玻尔兹曼方程以及G-V曲线任何突变的评估。

3

化合物对于电压门控离子通道在3种电压下失活的动力学分析。

部分测试

1

DR曲线(4-5个数据点),每个数据点取至少3次独立测试所得平均值。

2

化合物对于I-V曲线上IC50的影响

初步测试

1

a. 在单一剂量浓度、单一电压下重复测试化合物(n=2),或者,b. 在两种不同剂量浓度、3种电压下测试化合物(n=3

额外测试

1

化合物对于稳定状态失活曲线的影响

2

对于NCa2+通道,化合物对于G蛋白离子通道调控的影响的额外评估测试,包括对由于G蛋白偶联受体引起对于电压依赖的促进和/或抑制程度的改变的测试。

 

 

离子通道筛选细胞株

欧罗拉可提供最普遍的药物研发的离子通道靶点细胞株,以供购买以及许可认证用途。包括稳定表达hERG钾离子通道细胞株,Kv1.3钾离子通道细胞 株,或者Nav1.5钠离子通道细胞株,每种细胞株均经过优化,适用于离子析出分析以及电生理分析。这些细胞株测试窗口(信号/噪音)适用于高通量筛选。 配合欧罗拉的离子通道阅读器系列以及优化的试剂,能够得到稳定、灵敏的离子通道筛选分析结果。

hERG细胞株

药物引发的人类ether-a-go-go (hERG)钾离子通道抑制与QT间期延长有关,QT间期延长可导致心律不齐,例如尖端扭转型室性心动过速。因此,在药物研发过程化合物早期筛选中,对 hERG通道活性影响测试的显得尤为重要。我司CHO-hERG细胞株是专门针对可导致QT间期延长的化合物筛选而研发:

  • 稳定表达hERG钾离子通道
  • 已证实适用于电生理以及离子析出分析
  • 适用于高通量筛选(HTS)

Kv1.3 钾离子通道细胞株

Kv1.3钾离子通道已经证实可作为某些药物治疗靶点,例如多发性硬化、肥胖症以及其他相关疾病。为了获得Kv1.3离子通道拮抗的化合物筛选库, 需要一个稳定可靠的表达系统。欧罗拉的CHO-Kv1.3钾离子通道细胞株可高水平表达Kv1.3通道,随着时间推移也不会影响表达的稳定性。该细胞株:

  • 稳定表达Kv1.3钾离子通道
  • 已证实适用于电生理以及离子析出分析
  • 适用于高通量筛选(HTS)

Nav1.5 钠离子通道细胞株

心肌细胞的钠离子通道Nav1.5,也称为hH1a,是一种重要的心脏毒性筛选的靶点,因为该离子通道编码基因(SCN5a)的变异,可引起长QT 综合征(LQT3)。由于该变异引起的心律不齐相对于LQT1 (KVLQT1) 或 LQT2 (hERG)更容易致命。而且,该离子通道的非特异性药物结合可导致不正常的心率不整。因此,Nav1.5测试被纳入到心脏毒性筛选项目中。对于新型化学 实体的Nav1.5离子通道活性测试早期筛选,是药物研发过程中非常重要一环。我司的HEK-Nav1.5的钠离子通道细胞株是专为诸如新型化学实体 (NCEs)筛选而研发,该类钠离子通道细胞株:

  • 稳定表达Nav1.5钠离子通道
  • 已证实适用于电生理以及离子析出分析
  • 适用于高通量筛选 (HTS)

 

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